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Attiguo alla Cattedrale dei Santi Florido ed Amanzio, il Museo del Duomo si compone in 12 sale, su due piani, nei locali che un tempo appartenevano alla Canonica. Oltre alle opere di oreficeria e di manufatti, di particolare interesse risulta essere il“ Tesoro di Canoscio”, una delle scoperte più significative di arte paleocristiana del‘ 900 : una collezione di oggetti usati nella liturgia eucaristica, risalenti al VI secolo. Nella seconda sala spiccano per pregio il “Paliotto” in oro ed argento del XII secolo e il “Pastorale” opera di oreficeria del XIV secolo attribuito a Goro di Gregorio, orafo senese. Nello splendido salone gotico del piano superiore, il “Cristo in Gloria” di Rosso Fiorentino realizzato tra il 1528 e il 1530 e la “Madonna col Bambino e San Giovannino” del Pinturicchio del 1486.